Difenylomocznik - zamiennik cytokinin adeninowych

[Towarzysz Damian 9]

Cytokininy - pochodne puryn są bardzo drogie. Za 1g czystego BAPu musimy zapłacić około 200zł. Jest to duży wydatek, zwłaszcza dla osób zaczynających przygodę z hodowlą roślin in vitro. A jak wiemy cytokininy są niezbędnym składnikiem pożywki do hodowli tkankowych. Jednak alternatywą są cytokininy pochodzenia mocznikowego, które stymulują wytwarzanie hormonów w eksplancie roślinnym. Jedną z takich substancji jest difenylomocznik.

Jednak jest to substancja problematyczna. Nie rozpuszcza się w wodzie, ani w NaOH, czyli jest trudna do wprowadzenia w medium hodowlane. Ale gdy rozpuścimy difenylomoczniku w DMSO (dimetylosulfotlenek) to będzie on wchłaniany przez rośliny. Poza tym dimetylosulfotlenek jest nietoksyczną substancją łatwo przenikająca przez tkanki, więc mamy większą pewność, że DPU zostanie wchłonięty.

Dawkowanie: aby difenylomocznik w najbardziej skuteczny sposób oddziaływał na eksplanty roślinne powinniśmy dawkować go w odpowiednich ilościach.

Najbardziej wydajne to ilości: 30 mikro mole na 50ml oraz 100 mikro moli na 50ml. Ilość DMSO, w którym rozpuścimy odpowiednią ilość substancji to 0,025ml na 50ml.

Jak widzimy są to bardzo niewygodne ilości do odmierzenia, dlatego przeliczymy to na litr. Najpierw policzymy ile będziemy mieli DMSO na litr pożywki.

50ml pożywki - 0,025ml DMSO

1000ml pożywki - x

x = 0,5ml DMSO na litr

Teraz przeliczymy ilości DPU z mikro moli na gramy.

Zamieńmy mikro mole na mole:

32 mikro mole = 0,000032 moli

100mikro moli = 0,000100 moli

Masa cząsteczkowa DPU wynosi 212g. Stąd:

0,000032 moli - x₁

1 mol - 212g

x₁ = 0,006784g

0,000100 moli - x₂

1 mol - 212g

x₂ = 0,0212g

Powyżej otrzymaliśmy wynik w gramach na 50ml. Teraz przeliczymy ilość DPU potrzebną na 1 litr pożywki.

Dawka 32 mikro mole/50ml

50ml - 0,006784g

1000ml - y₁

y₁ = 0,13568g

czyli w przybliżeniu zastosujemy 0,14g na litr pożywki.

Dawka 100 mikro moli/50ml

50ml - 0,0212g

1000ml - y₂

y₂ = 0,424g

czyli w przybliżeniu zastosujemy 0,4g na litr pożywki.

Każdą dawkę rozpuszczamy w 0,5ml DMSO na litr.

Efekty,tzn. pojawienie się kallusa, w ciemności i w temp. 28st.C widać już po 2 tygodniach.

Więcej o zastosowaniu DPU możemy przeczytać w tej pracy badawczej:

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC383939/

A oto jak wyglądają wyniki użycia DPU, melisa 2 tygodnie od założenia kultury in vitro:

[DMchemik 61]

A ja bym tutaj dodał, że jest to sym-difenylomocznik, (N,N'-difenylomocznik), bo istnieje jeszcze jego izomer asym-difenylomocznik (N,N-difenylomicznik), z obiema grupami fenylowymi przy tym samym atomie azotu. ale to taki szczegół

[Towarzysz Damian 9]

Dzięki za sprostowanie, nie zauważyłem tego.

[ukGunther 0]

Ciekawe. Zobaczę czy uda mi się z bananem.

pozdrawiam